反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Primer Flexible）

產(chǎn)品貨號：F0202O

存儲條件：-20°C

產(chǎn)品組分：

產(chǎn)品簡介

RTase III Primer Flexible All-in-One Mix是一款高效、便減少污染的高質(zhì)量一鏈cDNA合成預(yù)混液， 包含M-MLV GIII Reverse Transcriptase及其反應(yīng) Buffer、RNA 酶抑制劑、dNTPs等一鏈 cDNA 合成所需的多種組分，還需加入RNA 模板、引物和水即可開始反應(yīng)，操作非常方便。針對不同實(shí)驗(yàn)設(shè)計可靈活使用不同類型的逆轉(zhuǎn)錄引物，滿足多樣化的實(shí)驗(yàn)需求，可根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)場景選擇Oligo(dT)20VN 或Random hexamers 或 Gene Specific Primers。使用該逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混液 15 分鐘內(nèi)最長可獲得12 kb大小的cDNA。

使用方法

1.于冰上配制如下反應(yīng)體系：

a.推薦使用試劑盒提取的已去除基因組 DNA 污染的高質(zhì)量 RNA 作為模板。

2.輕柔吸打混勻，瞬離；

3.55℃溫育 15 min；

注：若目標(biāo) RNA 不含 Poly(A) 結(jié)構(gòu)，可預(yù)先 25℃溫育 10 min。

4.反應(yīng)結(jié)束后，85℃溫育 5 min 以終止反應(yīng)；

5.將獲得的cDNA 溶液置于冰上，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；或立即保存于 -20℃。

注：

1.后續(xù)實(shí)驗(yàn)為克隆實(shí)驗(yàn)，若RNA 來源于真核生物，只需使用 Oligo (dT) VN 即可， 加入 Random hexamers 會降低全長 cDNA 的產(chǎn)量；若 RNA 來源于原核生物，只需使用 Random hexamers 或 Gene Speci?c Primers。

2.后續(xù)實(shí)驗(yàn)為qPCR，請同時加入Oligo(dT) VN和Random hexamers以獲得mRNA不同位置逆轉(zhuǎn)錄效率均一的cDNA。

注意事項(xiàng)

為了防止 RNase 污染，請保持實(shí)驗(yàn)區(qū)域潔凈；操作時需穿戴干凈的手套、口罩；實(shí)驗(yàn)所用的離心管、槍頭等耗材均需保證 RNasefree。