熒光標記鬼筆環肽488(綠色)

產品貨號：G0059  

Abs/Em (nm)：490/515

存儲溫度：-20℃干燥、避光保存，有效期見外包裝。若配制成水溶液，應小量分裝保存。

注意事項

本產品為凍干粉形式，微量不易觀察，使用前請瞬時離心，加適當溶劑溶解后使用，溶解后的溶液近乎透明色。

產品簡介

鬼筆環肽是從致命的傘形毒蕈蘑菇中分離出來的一種毒素。 它是特異性結合于 F-肌動蛋白的雙環肽。因此用熒光染料標記的鬼筆環肽可以非常方便的研究 F-肌動蛋白的分布。鬼筆環肽內部，在半胱氨酸和色氨酸之間含有不常見的硫醚橋形成內環結構。在pH 升高時，該硫醚被裂解，鬼筆環肽失去對肌動蛋白的親和力。

熒光標記的鬼筆環肽可在納摩爾水平染色F-肌動蛋白。在各種植物細胞或動物細胞中，標記的鬼筆環肽對大、小細絲具有相似的親和力，平均每個肌動蛋白亞基結合一個鬼筆環肽分子。不同于抗體，鬼筆環肽與肌動蛋白的結合親和力在不同物種間沒有顯著變化。非特異性染色可以忽略不計，染色和未染色區域之間的對比度非常大。鬼筆環肽將單體/聚合物的平衡轉向聚合狀態，將聚合臨界濃度降低至30倍。Phallotoxins可通過抑制細胞松弛素的解聚， 碘化鉀和升高的溫度，穩定 F-肌動蛋白，。因為鬼筆環肽綴合物很小，大約直徑12-15埃，分子量<2000道爾頓，多種肌動蛋白結合蛋白，包括肌球蛋白，原肌球蛋白和后肌鈣蛋白依然可以和鬼筆環肽標記的肌動蛋白結合。更重要的是， 鬼筆環肽標記的肌動蛋白絲保持功能，標記甘油肌纖維仍然收縮，標記的肌動蛋白絲仍然可以繼續移動。而且熒光標記的鬼筆環肽也可用于對細胞中 F-肌動蛋白進行定量研究。

實驗方法

儲液制備

熒光染料標記的鬼筆環肽：取適量甲醇或無菌水溶解棕色管中凍干的粉末，制備成200 T/mL的儲液（300T規格染料加入1.5 mL的液體，50T規格染料加入0.25 mL的液體即可）。

熒光標記鬼筆環肽的一個單位（T）的定義是染色一個加載細胞的載玻片所用染料的量。 對于熒光標記的鬼筆環肽，使用時的推薦稀釋比例為1:40-1:200，一個單位相當于200 μL總染色體積中加入1-5 μL 200T/mL儲備溶液。

注：稀釋比例可以根據實際染色效果進行適當調整。

固定細胞染色

以下方案是針對生長在玻璃蓋玻片或8孔室玻片上的貼壁細胞的染色步驟。鬼筆環肽也可用于染色固定的冷凍或石蠟組織切片。

1. 用PBS清洗細胞3次。

2. 用含有3.75％甲醛的PBS溶液固定細胞，冰上固定15 min。

注意：甲醇可以在固定過程中破壞肌動蛋白。因此最hao避免含有任何甲醇的固定劑。優選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

3. 用PBS清洗細胞3次。

4. 用含0.5％Triton X-100的PBS溶液在室溫下透化細胞10 min。

5. 用PBS清洗細胞3次。

6. 用200μL PBS稀釋1-5 μL熒光標記的鬼筆環肽儲液，加入一個蓋玻片或孔中，室溫孵育20min，進行染色。

注：染色體積可根據樣本情況進行調節。孵育過程中為避免染液揮發，可將蓋玻片放于密封容器內。

7. 用PBS清洗細胞2-3次。

8. 熒光顯微鏡觀察。標記的鬼筆環肽具有很好的光穩定，樣品可以在PBS中成像，但為了效guo最jia，也可以使用抗熒光淬滅劑觀察。

活細胞染色

熒光標記的鬼筆環肽不具有細胞透性，因此沒有被廣泛用于活細胞標記。然而，有報道稱活細胞可能通過胞飲或未知機制進行標記。一般來說，染色活細胞時需要更多的染料。或者，熒光標記的鬼筆環肽也可被注入到細胞中用于監測肌動蛋白分布和細胞運動。