Ni IDA Beads 6FF

產品貨號：N30230

儲存條件：2-8℃(20%?醇)

產品簡介

LABLEAD的Ni親和層析介質屬于?類?屬螯合介質，以?流速瓊脂糖為基質，以次氮基三?酸（NTA）或亞氨基??酸（IDA）為配基，并螯合?屬離?Ni²⁺?形成的?種親和層析介質。該親和介質不僅具有吸附容量?、選擇性好、分辨率?、超低限度的Ni²⁺泄露、易于再?、成本低等優點，還有利于保持產品的?物活性和提?產品的收率，從??泛?于?物制藥和?物?程下游蛋?質、核酸及多肽的分離純化，尤其是zu氨酸標記蛋?質的?效制備。

產品特點

使用耐壓基質,可以耐受最高0.3M Pa的壓力，更穩定，因此該產品更適合用于工業大規模蛋白的純化，可以在相對較高的流速下實現對目的蛋白的純化。

相關數據

操作說明

Ni-IDA Chromrose 6FF可以在實驗室被填裝到中壓層析柱中，以擴大產量。將填料填裝到層析柱中，根據樣本量和填料載量選擇合適的層析柱和柱高。

1. 緩沖液準備

所用緩沖液需要采用高純水配制，使用前建議用0.45um濾膜過濾。

平衡緩沖液：500mM NaCl，20mM Tris-Hcl，PH=7.4

漂洗緩沖液：500mM NaCl，20mM Tris-Hcl，10mM咪唑，PH=7.4

洗脫緩沖液：500mM NaCl，20mM Tris-Hcl，500mM咪唑，PH=7.4

2樣品準備

為了避免堵塞層析柱，樣品應經離?或微濾處理.進料量根據介質的載量和料液中?標蛋?的含量計算。

3樣品純化

（1）平衡：

?5~10CV的平衡緩沖液平衡層析柱，?流出液電導和pH不變（與平衡液?致）。對于結合?較強的帶zu氨酸標記的蛋?質，平衡緩沖液中可加?低濃度（20~40mM）的咪唑。

（2）進樣：樣品緩沖液應盡可能與平衡液?致。固體樣品可?平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可?平衡液透析，?濃度樣品溶液可?平衡液稀釋。

（3）淋洗：上樣完畢后繼續?平衡緩沖液淋洗?基線。

（4）洗脫：洗脫?般有兩種?式，?是采?競爭試劑，例如咪唑（0~0.5M）、zu氨酸（0~0.05M）、氯化銨（0~2M）等將蛋?質從柱?上置換下來；?是減?pH值，洗脫?標蛋?，?多數蛋?質在pH4~6的范圍內可被洗下來。?競爭試劑咪唑或減小pH值的?法洗脫蛋?質，?屬離子仍結合在柱?上；若?競爭試劑zu氨酸或氯化銨洗脫蛋?質，會將?屬離?和蛋?質的復合物?起洗下來。

注：

為了減少雜蛋?在層析柱上的吸附，可在確保?標蛋?吸附的情況下適當增加樣品緩沖液中的咪唑。對于包涵體蛋?，相應的可在平衡、上樣和洗脫的緩沖液中加?8M Urea或6M Gua-HCl。

洗脫緩沖液中必須加?0.15~1.0M NaCI，以消除離?交換作?。梯度洗脫最好在起始平衡液的恒定pH下進?，可采?線性梯度或階越式梯度洗脫。

（5）再生：介質使?數次（具體與樣品特性、樣品體積、?屬離?等有關）后，或者螯合其他?屬離?前，需要進?再?處理。?先?2~3 CV的0.1M EDTA和0.5M NaCl pH7.0清洗柱?，并?2~3CV以上的0.5M NaCl溶液清洗，除去主柱上殘留的EDTA，然后再螫合相應的?屬離?。若有變性蛋白質或脂類物質在再生過程中未能有效去除,可用原位清洗(CIP)的方法除去。

4原位清洗

為了避免不同樣品間的相互?擾，或者當介質污染?較嚴重時（反壓增加），需要對介質進?在位清洗。在位清洗前，需要預先除去介質上螯合的?屬離?（?再?操作）。在位清洗時，可采?反向沖洗的?法。

（1）對于以離?鍵結合的蛋?，可?2~3CV以上的2M NaCl清洗，并?3CV以上的純?沖洗。

（2）對沉淀蛋?、以疏?性結合的蛋?或脂蛋?，可?1M NaOH清洗（1~2h），并?3~10CV平衡液和3CV以上的純?沖洗。

（3）對疏?性結合的蛋?、脂蛋?和脂類物質，可?5~10CV的70%?醇或30%異丙醇清洗（20min以上），并?3~10CV的純?沖洗。

此外，也可?2CV含去污劑的堿性或酸性溶液清洗。如?0.1~0.5%的?離?去污劑+0.1M?酸沖洗1~2h，并?5~10CV的純?沖洗。