產(chǎn)品貨號(hào)：F7512S

儲(chǔ)存條件：-20℃

同裂酶：CciI, PagI（注：同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。）

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品簡介

 LabFD快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。所有LabFD快速內(nèi)切酶在通用的LabFD或 LabFD Color Buffer 中都具有優(yōu)良的活性，能夠在5~15分鐘內(nèi)完成酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD Buffer中均具有100%活性，支持一管化反應(yīng)，提升“酶切-修飾-連接"的體驗(yàn)。LabFD Color Buffer 包括紅色和黃色示蹤染料，可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。LabFD Color Buffer的紅色染料與2500 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與10 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

建議反應(yīng)條件：1×LabFD buffer；37℃溫育；參照“DNA 快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。

失活條件：80℃溫育 20 min。

質(zhì)量控制

功能活性檢測

37℃下，在 20ul 反應(yīng)體系中，1ul LabFD^TM BspHI能夠在 15min 內(nèi)wan全消化1ug λDNA。

超長時(shí)間溫育檢測

37℃下，在 20ul 反應(yīng)體系中，將1ul LabFD^TM BspHI與1ug λDNA共同溫育 3h，未檢測到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解，更長時(shí)間酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性。

酶切-連接-再酶切檢測

37℃下，使用 10倍酶量的 LabFD^TM BspHI消化 DNA 底物，回收酶切產(chǎn)物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以將超過95%的酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開月95%以上的連接產(chǎn)物。

使用方法

1.DNA 快速酶切流程

（1）在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系： 

注：本體系適用于經(jīng)過純化的PCR產(chǎn)物酶切。未純化的PCR產(chǎn)物具備一定的離子強(qiáng)度，10×LabFD Buffer 加入量可適當(dāng)減少至2 μl。但由于DNA聚合酶同時(shí)具有外切酶活性，會(huì)影響酶切產(chǎn)物，因此如下一步需進(jìn)行克隆等操作，建議酶切前對PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化。

（2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴；

（3）37℃溫育15 min（質(zhì)粒），或15~30 min（PCR產(chǎn)物），或30~60 min（基因組DNA）；

（4）80℃溫育 20 min 即可使酶失活，終止反應(yīng)（可選）;

(5) 如果使用LabFD^TM Color Buffer進(jìn)行酶切反應(yīng)，得到的產(chǎn)物可以直接進(jìn)行上樣電泳。

2. 雙酶切或多酶切

（1）每種快速內(nèi)切酶的用量為1 μl，并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系；

（2）所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的1/10；

（3）如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應(yīng)溫度下進(jìn)行酶切反應(yīng)。

3. 適用于質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系

注：如果總反應(yīng)體系大于20 μl，應(yīng)適當(dāng)增加溫育時(shí)間，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。

不同 DNA 中的酶切位點(diǎn)數(shù)量

甲基化修飾影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性

注：活性數(shù)據(jù)來自 LABLEAD 限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測。